干货分享|Magneti-Q 标签蛋白纯化试剂盒常见问题解答

 

常见问题 问题解答
试剂盒应用场景 1)小量表达,需要快速得到蛋白用于下游实验可用该系列试剂盒进行快速纯化;
2)只带有特定标签的蛋白可用该系列试剂盒进行快速纯化;
3)和Ni配体的磁珠相比,Magneti-Q His标签蛋白纯化试剂盒可以纯化表达低的蛋白,而获得纯度更高的蛋白;
4)可以做为最后一步精纯使用,有些实验如亲和力分析、蛋白测序、质谱分析对蛋白纯度要求高,可选择该系列试剂盒。
说明书中标注的1ml磁珠,是磁珠是1ml还是buffer加磁珠1ml? 1ml是磁珠体积、磁珠柱体积为20%。如磁珠规格是1ml的,柱体积为20%,到手的总体积是5ml。
偶联的标签抗体是什么种属的? 人源
磁珠能反复利用吗? 可以重复利用的。由于标签不同,再生之后的性质也不同,所以重复使用次数也不一样。
其中flag标签磁珠和His标签磁珠最多可以重复5次,Myc和HA最多3次。
铁锤+磁珠法纯化试剂盒,这个组合能搭配使用吗? 不建议搭配使用。
铁锤里面含有去污剂,纯化试剂盒里面的磁珠是抗体纯化磁珠,去污剂影响抗体和抗原的结合。
抗体标签蛋白纯化试剂盒中的buffer PH是多少呀? A是酸性 pH 3.0,C是高盐 pH 8.0,D是变性 pH是7.4。
试剂盒中有三种洗脱液,说明书推荐四种洗脱液,如何使用? 干货分享|Magneti-Q 标签蛋白纯化试剂盒常见问题解答插图
1)首次实验,不知道如何选择,推荐先用Elution C进行洗脱,洗脱后用20mM Tris缓冲液对半稀释后进行电泳检测;
2)明确蛋白耐酸的情况下建议客户使用Elution A进行洗脱;
3)不清楚目的蛋白是否耐酸,希望能够得到高活性的蛋白建议使用Elution B进行洗脱。
蛋白纯化试剂盒2ml或者1ml的能纯化多少量啊,是蛋白越大纯化量就会越少吗? 1ml磁珠20kd的蛋白理论载量2.5mg。
理论上来说蛋白越大,载量越高,但不同蛋白的性质不一样,比如标签裸露的位置跟蛋白的二级三级结构等都有关系,可以先用20ul做个小试,然后根据小试结果进行放大。
样品纯化后SDS-PAGE没有目的条带? 1)蛋白表达量太低,SDS-PAGE电泳原样看不到任何目的条带,导致最终纯化不到目的蛋白;
2)使用铁锤裂解液裂解细胞,铁锤裂解液中含有较高浓度的去污剂,影响抗体和抗原的结合,导致目的蛋白直接流穿,
改进方法是对于真核细胞表达的胞内蛋白,推荐用超声进行细胞破碎,能够提高蛋白的得率。

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