产品背景
Magneti-Q 商标来自于磁性(Magnetic)的英文谐音,Q 为琼脂糖的汉语拼音的首字母,因此带有这一商标的产品,均为琼脂糖材质的磁性微 球。这 一 商 标 主 要 用 于 一 系 列 基 于 抗 体 亲 和 方 法 的 标 签 蛋 白 纯 化 试 剂 盒,目 前 已 有 Anti-His-tag、Anti-Myc-tag、Anti-HA-tag、Anti-DYKDDDDK-tag 四种标签蛋白纯化试剂盒,可以用来一步法纯化His标签、Myc标签、HA标签和DYKDDDDK标签蛋白的纯化。后续将根据客户的需求,基于Magneti-Q琼脂糖磁珠开发更多相关产品。
产品介绍
本产品主要用于标签融合蛋白的纯化,它将抗体偶联在 Beads 上,这样可以把带有对应标签的融合蛋白结合到 Beads 上。经过缓冲液去除杂蛋白等步骤之后,再使用试剂盒中低 pH、高盐、多肽竞争、去垢剂或者变性剂等洗脱液从将融合蛋白从 偶联Beads 上洗脱下来,从而达到快速纯化蛋白的目的。
产品特点
1. Magneti-Q标签抗体纯化试剂盒可以满足于不同标签(DYKDDDDK、His、Myc和HA)标签蛋白的快速捕获和高效洗脱;
2. 本系列产品能够实现自动化和通量化,手动操作也只需一个磁力架就能轻松完成蛋白纯化的工作;
3. 将标签抗体定向偶联至琼脂糖磁珠上,最大程度的提高了抗体标签磁珠的载量,并且为了满足客户不同的实验目的提供了四种洗脱缓冲液;
4. 本系列产品提供红色荧光蛋白作为阳性对照,可以有效的验证本产品的使用效果。
实验结果
Magneti-Q DYKDDDDK标签蛋白纯化试剂盒
从图1可以看出,20 μl磁珠对2 ml样品进行纯化,并不能完全捕获目的蛋白,主要原因是培养上清中的标签蛋白总量超过了填料的最大载量(2.5 μg/μl*20 μl=50 μg)。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution Buffer C>Elution Buffer A>Elution Buffer B。注意本案例使用的是3×DYKDDDDK多肽洗脱,电泳上会看到大量多肽残留,实际使用过程中可以使用1×DYKDDDDK多肽进行洗脱,多次实验证明并不会影响洗脱效率,电泳上也不会有多肽条带(见图2)。
从图3可以看出,该蛋白在胞内表达条带不明显,但20 μl磁珠对1 ml裂解液样品进行纯化,可有效捕获目的蛋白。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution Buffer C>Elution Buffer B>Elution Buffer A。多肽洗脱将引入大量的DYKDDDDK多肽。
Magneti-Q HA标签蛋白纯化试剂盒
从图4可以看出,20 μl磁珠对2 ml样品进行纯化,并不能完全捕获目的蛋白,主要原因是培养上清中的标签蛋白总量超过了填料的最大载量(2.0 μg/μl*20 μl=4 μg)。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution C>Elution A>Elution B。HA多肽在SDS-PAGE电泳图上是看不到的。
从图5可以看出,该蛋白在胞内表达条带不明显,但20 μl磁珠对1 ml裂解液样品进行纯化,可有效捕获目的蛋白。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution C>Elution B>Elution A。HA多肽在SDS-PAGE电泳图上是看不到的。
Magneti-Q His标签蛋白纯化试剂盒
从图6可以看出,20 μl磁珠对2 ml样品进行纯化,并不能完全捕获目的蛋白,主要原因是培养上清中的标签蛋白总量超过了填料的最大载量(2.5 μg/μl*20 μl=50 μg)。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution C>Elution A>Elution B。多肽洗脱将引入大量的His多肽。
从图7可以看出,该蛋白在胞内表达条带不明显,但20 μl磁珠对1 ml裂解液样品进行纯化,可有效捕获目的蛋白。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution C>Elution B>Elution A。多肽洗脱将引入大量的His多肽。
Magneti-Q Myc标签蛋白纯化试剂盒
从图8可以看出,20 μl磁珠对2 ml样品进行纯化,并不能完全捕获目的蛋白,主要原因是培养上清中的标签蛋白总量超过了填料的最大载量(2.5 μg/μl*20 μl=50 μg)。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution Buffer C>Elution Buffer A>Elution Buffer B。Myc多肽在SDS-PAGE电泳图上是看不到的。
从图9可以看出,该蛋白在胞内表达条带不明显,但20 μl磁珠对1 ml裂解液样品进行纯化,可有效捕获目的蛋白。三种洗脱液的洗脱效率不同,洗脱效率:Elution Buffer C>Elution Buffer B>Elution Buffer A。
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