一、产品优势
ACE rProtein A/G Magnetic IP/Co-IP Kit 是一款能够高效完成免疫沉淀（IP）及免疫共沉淀（Co-IP）实验的试剂盒。本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。本试剂盒具有以下优势：①目的蛋白的率高；②条带干净背景低；③操作简单，使用方便；④最快1h完成免疫沉淀实验。
二、常见问题解答
| 问题 | 原因分析 | 推荐解决方案 |
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抗原没有免疫沉淀下来 |
样品中抗原量过少 | 通过SDS-PAGE或WesternBolt验证蛋白表达或裂解效率，将抗原量提高至推荐用量 |
| 抗体与抗原结合力太弱或无法结合 | 优化Lysis/Wash Buffer | |
| 更换结合力/特异性更强的抗体，或选择另一种识别不同表位的抗体 | ||
| 蛋白质被降解 | 加入蛋白酶抑制剂 | |
| 对温度敏感的抗原，尽量在4℃或冰浴条件下进行实验操作 | ||
| 洗脱组分中没有目的抗原 | 蛋白可能是包涵体，没有在上清中 | 可以通过电泳检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式 |
| 表达量太低 | 优化表达条件 | |
| 洗脱条件过于温和 | 延长洗脱孵育时间，或用更强的洗脱液 | |
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洗脱下的抗体条带干扰目 标抗原条带判断 |
抗原条带接近25 kDa或50 kDa |
SDS-PAGE前请勿还原样品，抗体条带则迁移至160 kDa附近 |
| 进行蛋白免疫印迹时，选择使用不同种属来源的抗体（例如一抗为鼠IgG时，二抗选用兔IgG） | ||
| 改用直接法将抗体直接交联至填料 | ||
| 非特异性条带明显 | 有非特异性的蛋白结合在磁珠上 | 优化漂洗液组分，例如加入50-350mM NaCl |
| 进行蛋白免疫印迹时,清洗不充分 | 增加清洗次数 |
1.说明书上提供了两种实验方案，我该如何选择？
免疫沉淀（IP）主要针对的是纯化单一抗原的实验。抗原-抗体复合物的组合既可以分步进行， 也可以一步完成。下面提供两种常用的孵育方案：
方案一，先将抗体和样品 ( 如细胞裂解物 ) 混合孵育， 然后加入亲和用微球， 结合抗体-抗原复合物。
方案二，先将抗体和亲和微球先进行孵育结合，然后加入含有抗原的样本，依靠亲和微球-抗体复合物来捕获目标抗原。
2.我要做Co-IP实验，说明书中只介绍了IP操作的步骤，我应该怎么做？
免疫共沉淀分析（Co-IP）与IP十分相似，实验的方案和基本流程与IP相同，当制备好亲和微球-抗体-抗原复合物后，可以加入待测样品混合孵育，基本上所有IP的体系均可以用于 Co-IP。
3.一次实验需要准备多少样品量？
一次实验亲和微球的用量是20ul，能结合的抗体量是5ug左右，细胞裂解液的体积在200-500ul。细胞量的选择及裂解浓度在说明书中有详细介绍。
4.酸性洗脱和变性洗脱有什么区别？
酸性洗脱后立即中和，对获得的目的蛋白活性影响较小，除可以用于SDS-PAGE实验，也可用于质谱等分析实验。变性洗脱获得的蛋白失活，一般只用于SDS-PAGE实验及后续银染或者WB等验证。
三、注意事项
①在保证洗杂效果的前提下，如果使用 1×Lysis/Wash Buffer(Enhanced) 洗杂，会造成抗体和介质，或者抗原和抗体之间结合效果降低，建议可以使用 1×Lysis/Wash Buffer 进行洗杂。
②磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥，使用前请充分混匀。
③ 如果需要在还原条件下洗脱，向 1× 电泳上样缓冲液中加入 DTT ( 终浓度 10-20 mM)。
④经煮沸后的填料易聚集并且失去抗体结合能力，经煮沸的填料不应再次使用。
⑤为保证最佳的实验结果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。
⑥ 对于免疫沉淀实验，不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到的影响，因此，若本试剂盒提供的缓冲体系不能获得很好的实验结果，可自行优化缓冲液进行实验。
⑦实验设计时，建议加入对照组，以备后续实验结果分析，在确定实验结果前，建议保留各步骤抗原、抗体孵育后的样品以备验证。
⑧所有操作建议于 4℃下进行。
