一、产品介绍
本产品是基于鲁米诺底物的化学发光试剂盒，能够被辣根过氧化物酶（HRP）催化发光。本试剂盒优化了底物组成，使用了新型高效增强剂，发光强度比传统ECL显色液提高了30-100倍，并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水，提高了试剂盒的稳定性，室温可稳定放置1年。发光检测工作液被HRP催化后，发出特定波长荧光（400-450 nm），可对X光胶片曝光，也可直接使用荧光CCD扫描，主要应用于Western检测以及化学发光免疫检测系统。
二、缓冲液配制
一抗工作浓度：0.2-1.0 µg/mL；
HRP标记二抗工作浓度：10-500 ng/mL，根据二抗效价调整；
发光检测工作液的使用比例：Solution I : Solution II = 1:1；10 cm2
转印膜使用1-2 mL工作液。
抗体去除液
ECL Basic：0.1 M 甘氨酸，HCl调整pH至2.7；
ECL Enhanced：2% SDS, 0.1 M β-mercaptoethanol, 50 mM Tris-HCl, pH 7.0；
ECL Super：6 M GuHCl, 0.2% Nonidet P-40 (NP-40), 0.1 M β-mercaptoethanol, 20 mM Tris-HCl, pH7.5。
三、产品特点
①灵敏度高，发光强度时传统ECL的30-100倍；
②背景低，优化后的底物组成，有效降低了背景；
③稳定性高，通过优化配方，室温可稳定放置一年；
④选择灵活，多种灵敏度可选，满足不同需求；
四、操作步骤
根据常规操作转印结束后，进行封闭、一抗孵育、二抗孵育以及必要的洗膜步骤，根据膜的大小，按每10 cm2 膜使用1-2 mL工作液，按比例吸取等体积Solution I和Solution II混匀，配制成发光检测工作液。用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体。用移液器将工作液加到转印膜上，使其均匀覆盖，室温孵育1-2 min，此步骤可在洁净保鲜膜上或塑料盒中完成。
1. X光胶片法
①用平头镊子夹起转印膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体，留下少量工作液，不要让膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡，用小块透明胶带粘住四角，固定在X光片暗盒内。
②在暗室中取一张X光胶片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光30 s至1 min。立即定影、显影，根据曝光强度，调整下一张X光胶片的曝光时间。如果背景过高，可以使用两张X光胶片同时压片。
2.荧光拍照法
①如果需要使用CCD拍照，可以将膜放置于工作液中，开机后按照使用说明，将转印膜取出，进行拍照。
②可以根据背景情况，调整机器测量参数，提高信噪比。
3.管式化学发光法
①将鲁米诺的化学发光检测波长可设定在425 nm左右，可以选择单点测量，或者取多次平均值。
②按照机器要求，将配制好的工作液加入到样品管中，间隔一定时间测量发光强度，注意鲁米诺系统的发光到达峰值有一定延迟（30-300 s），不同样本的测量时间间隔要固定。
③HRP催化鲁米诺发光的体系还受到反应温度以及pH的强烈影响，所以工作试剂准备以及发光测量需要考虑到此类因素。
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