一、产品优势
①灵敏度高,发光强度时传统ECL的30-100倍;
②背景低,优化后的底物组成,有效降低了背景;
③稳定性高,通过优化配方,室温可稳定放置一年;
④选择灵活,多种灵敏度可选,满足不同需求;
二、常见问题解答
问题 | 原因分析 | 原因分析 |
胶片无条带显现或者信号较弱 |
转膜的效率低 | 用预染色分子量标准来判断,提高转膜效率 |
抗原/抗体量少或不匹配 | 增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体 | |
X光胶片有问题 | X光片洗片以后应当为透明的胶片,如果全黑则说明已经完全曝光了,应当废弃 | |
定显影液有问题 | 可以先曝光一张胶片来验证,若有问题及时更换新的定显影液 | |
反应系统中HRP量过多 | 稀释HRP标记物 | |
X光胶片背景脏 | 一抗、二抗浓度太高 | 降低抗体浓度,延长封闭时间 |
抗体未清洗干净 | 增加洗膜次数 | |
条带有空斑 | 抗原以及二抗的浓度过高 | 稀释样品重新跑胶, 也可以将混合好的显色液冰浴后,加入到 膜上,立即快速显色 |
条带不规则 | 转膜时有气泡也有可能是转印 膜没有水化均匀剂盒 | 转膜时尽量优化条件 |
三、注意事项
①试剂盒Solution I为底物,保存于避光试剂瓶中,Solution II为氧化剂。通常取样顺序是先取底物Solution I, 换枪头后再取氧化剂Solution II。
②本试剂盒较为稳定,室温(25℃)可以保存一年以上,长期不用建议保存在2-8℃。
③使用生物素-亲和素系统时,避免使用牛奶封闭,可能会造成背景过高。
④金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,可以使用平头塑料镊子。
⑤叠氮化钠抑制HRP的催化能力,在缓冲液中尽量避免使用叠氮化钠作为防腐剂。
⑥封闭、洗膜、孵育等步骤耗时较长,注意膜与塑料界面的摩擦不均匀可能造成部分位置条带消失,可以在保鲜膜中孵育以及封闭,洗膜的塑料盒底面不要有明显凸起,可以通过剪角的方法,区别转印膜有蛋白的一面。
⑦不同转印膜对蛋白的吸附能力不同,硝酸纤维素较软,避免出现折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均匀。
⑧勿将多张膜置于同一个洗膜盒中洗膜,相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。
⑨转印、封闭、孵育都要避免气泡。