干货分享 | ECL化学发光试剂盒常见问题和注意事项

一、产品优势

①灵敏度高,发光强度时传统ECL的30-100倍;

②背景低,优化后的底物组成,有效降低了背景;

③稳定性高,通过优化配方,室温可稳定放置一年;

④选择灵活,多种灵敏度可选,满足不同需求;

二、常见问题解答

问题 原因分析 原因分析
 

 

 

胶片无条带显现或者信号较弱

转膜的效率低 用预染色分子量标准来判断,提高转膜效率
抗原/抗体量少或不匹配 增加抗原/抗体量或选择合适抗原/抗体
X光胶片有问题 X光片洗片以后应当为透明的胶片,如果全黑则说明已经完全曝光了,应当废弃
定显影液有问题 可以先曝光一张胶片来验证,若有问题及时更换新的定显影液
反应系统中HRP量过多 稀释HRP标记物
X光胶片背景脏 一抗、二抗浓度太高 降低抗体浓度,延长封闭时间
抗体未清洗干净 增加洗膜次数
条带有空斑 抗原以及二抗的浓度过高 稀释样品重新跑胶, 也可以将混合好的显色液冰浴后,加入到 膜上,立即快速显色
条带不规则 转膜时有气泡也有可能是转印 膜没有水化均匀剂盒 转膜时尽量优化条件

三、注意事项

①试剂盒Solution I为底物,保存于避光试剂瓶中,Solution II为氧化剂。通常取样顺序是先取底物Solution I, 换枪头后再取氧化剂Solution II。
②本试剂盒较为稳定,室温(25℃)可以保存一年以上,长期不用建议保存在2-8℃。
③使用生物素-亲和素系统时,避免使用牛奶封闭,可能会造成背景过高。
④金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,可以使用平头塑料镊子。
⑤叠氮化钠抑制HRP的催化能力,在缓冲液中尽量避免使用叠氮化钠作为防腐剂。
⑥封闭、洗膜、孵育等步骤耗时较长,注意膜与塑料界面的摩擦不均匀可能造成部分位置条带消失,可以在保鲜膜中孵育以及封闭,洗膜的塑料盒底面不要有明显凸起,可以通过剪角的方法,区别转印膜有蛋白的一面。
⑦不同转印膜对蛋白的吸附能力不同,硝酸纤维素较软,避免出现折痕。PVDF膜使用前需要使用甲醇水化均匀。
⑧勿将多张膜置于同一个洗膜盒中洗膜,相互吸附以及摩擦可能造成很深的背景。
⑨转印、封闭、孵育都要避免气泡。