干货分享 | FuturePAGE™蛋白预制胶常见问题和注意事项

一、产品优势

FuturePAGE™蛋白预制胶采用全自动凝胶灌注技术,产品的重复性好,质量稳定。独特的凝胶缓冲配方使蛋白电泳条带更为清晰锐利,更加均匀,分辨率更高。

二、常见问题解答

①FuturePAGE™蛋白预制胶尺寸、厚度?

胶板约10×8 cm,厚4. 5 mm;胶体约8.5×7 cm,厚1 mm。(测量存在一定误差)。

②FuturePAGE™蛋白预制胶适用电泳槽?

天能、伯乐、六一、WIX等 。

③FuturePAGE™蛋白预制胶每个胶孔的最大上样量是多少?

12孔胶最大上样量50 μL,15孔胶最大上样量30 μL。

④FuturePAGE™蛋白预制胶跑胶参数?

160 V,40-45 min。电压不超过180 V。

⑤FuturePAGE™蛋白预制胶的体系是什么,用什么电泳液?

预制胶为Bis-tris体系,目前使用Mops电泳液。Mops电泳液配方:50 mM Tris,5 0mM Mops,0.1% SDS,1mM EDTA,pH7.8。

三、问题条带解答

①电泳条带跑不下去,指示剂在加样孔内不动

可能原因:底部蓝色胶条没撕;解决办法:撕掉胶板底部蓝色胶条

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②指示剂偏斜

可能原因:电泳槽漏液;解决办法:调整胶板位置,检查密封条

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③电泳下端条带发黄

可能原因:电泳液从变形、损坏的胶板渗入;解决办法:选用合适的电泳槽,确认胶板是否损坏

可能原因:外槽电泳液太少,卡在临界点;解决办法:补齐电泳液

可能原因:电泳液pH值下降;解决办法:用去离子水重新配置电泳液

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④蛋白条带拖尾

可能原因:样品溶解不佳或者降解;解决办法:(1)样品加热,离心取上清(2)制备新鲜样品

干货分享 | FuturePAGE™蛋白预制胶常见问题和注意事项插图3

指示剂呈倒三角状,即两边低、中间高,形成峰顶

可能原因:内、外槽电泳液量不够;解决办法:补满内槽电泳液,外槽电泳液补至2/3高度

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⑥指示剂出现弧度

可能原因:底部出口被电泳槽上胶条部分覆盖或者胶板底部没卡紧;解决办法:调整胶板位置,避免底部出口和胶条重合

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⑦指示剂条带异常是什么原因导致

可能原因:使用错误的电泳液;解决办法:使用MOPS-SDS Running Buffer

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四、注意事项

①样本上样前需进行高速离心。
②样本上样前建议测蛋白浓度,每个上样孔蛋白总量不建议超过 30 μg。
③样本上样前盐浓度不建议超过 100 mM。
④样本加入 Loading buffer 后建议加热 20 mins,确保蛋白充分变性。
⑤大肠杆菌样本建议加入核酸酶处理。

 

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