ACE产品介绍 | ECL化学发光试剂盒

一、产品介绍

本产品是基于鲁米诺底物的化学发光试剂盒,能够被辣根过氧化物酶(HRP)催化发光。本试剂盒优化了底物组成,使用了新型高效增强剂,发光强度比传统ECL显色液提高了30-100倍,并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水,提高了试剂盒的稳定性,室温可稳定放置1年。发光检测工作液被HRP催化后,发出特定波长荧光(400-450 nm),可对X光胶片曝光,也可直接使用荧光CCD扫描,主要应用于Western检测以及化学发光免疫检测系统。

二、缓冲液配制

一抗工作浓度:0.2-1.0 µg/mL;

HRP标记二抗工作浓度:10-500 ng/mL,根据二抗效价调整;

发光检测工作液的使用比例:Solution I : Solution II = 1:1;10 cm2

转印膜使用1-2 mL工作液。

抗体去除液

ECL Basic:0.1 M 甘氨酸,HCl调整pH至2.7;

ECL Enhanced:2% SDS, 0.1 M β-mercaptoethanol, 50 mM Tris-HCl, pH 7.0;

ECL Super:6 M GuHCl, 0.2% Nonidet P-40 (NP-40), 0.1 M β-mercaptoethanol, 20 mM Tris-HCl, pH7.5。

三、产品特点

①灵敏度高,发光强度时传统ECL的30-100倍;

②背景低,优化后的底物组成,有效降低了背景;

③稳定性高,通过优化配方,室温可稳定放置一年;

④选择灵活,多种灵敏度可选,满足不同需求;

ACE产品介绍 | ECL化学发光试剂盒插图

四、操作步骤

根据常规操作转印结束后,进行封闭、一抗孵育、二抗孵育以及必要的洗膜步骤,根据膜的大小,按每10 cm2 膜使用1-2 mL工作液,按比例吸取等体积Solution I和Solution II混匀,配制成发光检测工作液。用平头镊子将膜取出,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体。用移液器将工作液加到转印膜上,使其均匀覆盖,室温孵育1-2 min,此步骤可在洁净保鲜膜上或塑料盒中完成。

1. X光胶片法

①用平头镊子夹起转印膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不要让膜完全干燥。膜的蛋白面朝上,包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡,用小块透明胶带粘住四角,固定在X光片暗盒内。
②在暗室中取一张X光胶片置于包裹的膜上,合上暗盒,曝光30 s至1 min。立即定影、显影,根据曝光强度,调整下一张X光胶片的曝光时间。如果背景过高,可以使用两张X光胶片同时压片。

2.荧光拍照法

①如果需要使用CCD拍照,可以将膜放置于工作液中,开机后按照使用说明,将转印膜取出,进行拍照。
②可以根据背景情况,调整机器测量参数,提高信噪比。

3.管式化学发光法

①将鲁米诺的化学发光检测波长可设定在425 nm左右,可以选择单点测量,或者取多次平均值。
②按照机器要求,将配制好的工作液加入到样品管中,间隔一定时间测量发光强度,注意鲁米诺系统的发光到达峰值有一定延迟(30-300 s),不同样本的测量时间间隔要固定。
③HRP催化鲁米诺发光的体系还受到反应温度以及pH的强烈影响,所以工作试剂准备以及发光测量需要考虑到此类因素。

 

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