ACE产品介绍 | 磁珠法IP/Co-IP试剂盒

一、产品的介绍

ACE rProtein A/G Magnetic IP/Co-IP Kit 是一款能够高效完成免疫沉淀(IP)及免疫共沉淀(Co-IP)实验的试剂盒。其包含高性能 rProteinA/G MagPoly Beads,能够实现快速便捷的磁性分离。另外试剂盒内经过优化的缓冲液,为免疫沉淀实验提供了良好的反应条件,增强了免疫沉淀实验的稳定性。聚合物磁珠的配体是重组蛋白 A/G(约 14 kDa),同时拥有蛋白 A 和蛋白 G 的 IgG 结合结构域,具有更广的抗体亚型结合范围。试剂盒的洗脱方式多样,既可以用低 pH 的洗脱液将免疫复合物从蛋白 A/G 磁珠上洗脱,也可以使用电泳上样缓冲液以变性条件洗脱免疫复合物,直接进行后续检测分析。

二、 产品组分

本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应,具体组分见表 1。

组分名称 规格(10 T) 规格(50 T)
rProtein A/G MagPoly Beads 200 μL(10 mg/mL) 1 mL(10 mg/mL)
Lysis/Washing Buffer(5×) 10 mL 25 mL*2
Lysis/Washing Buffer Enhanced 100 μL 500 μL
Elution Buffer 500 μL 1 mL*5
Neutralization Buffer 2 mL 2 mL

表1.rProtein A/G Magnetic IP/Co-IP Kit产品组分

三、产品特点

①目的蛋白的率高;

②条带干净背景低;

③操作简单,使用方便;

④最快1h完成免疫沉淀实验;

ACE产品介绍 | 磁珠法IP/Co-IP试剂盒插图

四、操作步骤

1.缓冲液的准备

可使用试剂盒准备的缓冲液,也可根据实际情况配制不同的缓冲液体系。Lysis/Wash Buffer(5×) 在使用前请稀释至并标记为 1×Lysis/Wash Buffer,另根据需求,补加终浓度为 0.1%-1% 的 Lysis/Wash Buffer Enhanced,标记为 1×Lysis/Wash Buffer(Enhanced)。所有缓冲液在使用前建议用 0.22 μm 或者 0.45 μm 滤膜过滤,稀释后的缓冲液建议 4℃保存,若试剂浑浊,请立即丢弃。

2.样品准备

包含贴壁细胞的裂解和悬浮细胞的裂解(详细裂解过程见产品说明书),裂解完毕后, 将上清转移到一个新管中,进行蛋白浓度测定及后续实验,标记为细胞裂解样品。

3. 免疫沉淀

抗原、抗体与磁珠的结合顺序可根据实际情况调整,不同的孵育顺序对最终纯度及抗原产量均有影响,以下方案为推荐常用的实验方法。

①磁珠漂洗:需将 rProtein A/G MagPoly Beads充分混匀,加入1×Lysis/Wash Buffer(Enhanced)漂洗。详细操作见产品说明书。

②免疫沉淀:方案一为磁珠先与抗体混合孵育,然后再加入细胞裂解样品进行孵育;方案二将细胞裂解样品与抗体混合孵育,将孵育后的样品加入准备好的磁珠中混旋孵育。详细操作见产品说明书。

③磁珠漂洗:需将免疫沉淀的样品充分混匀,加入1×Lysis/Wash Buffer(Enhanced)漂洗。详细操作见产品说明书。

④洗脱:方案一 低 pH 洗脱;方案二 备选洗脱方法(变性洗脱);两种洗脱方案均包含捕获抗体及目的抗原,低 pH 洗脱样本中抗体为完整结构,可以用于SDS-PAGE实验、质谱实验,变性洗脱样本中抗体解离为重链、轻链,根据后续实验需求选择洗脱方案。

 

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