干货分享 | BCA Protein Assay Kit常见问题和注意事项

一、注意事项

①当 Solution B 加入到 Solution A 中时,开始可观察到有浑浊产生,搅拌后浑浊迅速消失,得到果绿色的澄清工作液。根据所要检测的样品数量,配制足够体积的工作液。配制好的工作液在室温密闭容器中可稳定保存 24 h。
②该方法不是终点法,孵育完成后,工作液和待测样品混合液仍会继续显色,但室温的显色速率较慢,请在 10 min 内完成所有样品检测,就不会产生明显误差。
③标准方案检测时,如实验条件限制无法进行 37℃孵育,也可选择室温孵育 2 h。
④延长孵育时间或者升高温度会使工作液与待测样品反应颜色变深,在 562 nm 处吸收值变高,影响读数的准确性,降低试剂的检测灵敏度。
⑤增强方案操作不建议在微孔板中进行,因微孔板中样品量较少,加热过程中易挥发,影响检测准确度。
⑥ BCA 试剂盒对各试剂的耐受浓度,请查询我们的网站信息。
⑦不同蛋白用 BCA 试剂盒检测,都会有独特的吸光度反应。通常使用 BSA 作为标准定量未知蛋白的浓度,但如果需要精确定量,请使用高纯度目的蛋白做标准品。其他蛋白相对 BSA 的吸光度系数,请查询我们的网站信息。

二、常见问题及解决方法

 

问题 原因分析 解决方案
工作液和样品混合后未显色 样品中含有铜离子螯合试剂 对样品进行透析、脱盐或稀释处理
样品显色比预计颜色深 样品浓度过高 将样品稀释
空白标准品吸光值正常,标准品和待测样品显示的颜 色比预计值低 检测波长不正确 在562 nm处检测吸收值
缓冲液为强酸或强碱,工作液pH被改变 对样品进行透析,脱盐或者稀释
所有试管(包括空白试管)都呈现暗紫色 缓冲液中含有还原剂 对样品进行透析或者稀释
缓冲液中含有巯基
缓冲液中含有生物胺
分光光度计或酶标仪不具备562 nm滤光片 采用540 nm-590 nm读数 样品在540 nm-590 nm之间的任意波长都可能检测到颜色变化,但灵敏度会降低