干货分享 | 蛋白定量的方法(二)

之前我们介绍了三种常用的蛋白定量方法,其中之一就是蛋白-铜螯合化学试剂法,即BCA法。今天就聊聊基于此原理我们开发的BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒是目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一。基本原理如下:

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下面介绍一下ACE的试剂盒性能。

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BCA试剂盒标准曲线

BCA试剂盒可以检测的蛋白浓度范围为20-2000 µg/mL,如果需要检测的未知样品浓度比较低,精确度要求较高,可以选择低浓度标准品范围(5-250 µg/mL),同样也能制作出较完美的标准曲线,用于蛋白定量。

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工作液的稳定性

工作液0小时和24小时的标准曲线对比

干货分享 | 蛋白定量的方法(二)插图4

BCA工作液配制好后,室温可以稳定存放24 h,期间制作的标曲不会发生变化,稳定性好。

BCA试剂保存条件

我们的试剂盒所含试剂可以在室温下稳定的保存较长时间。

试剂盒保存标准曲线测试

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常温条件下保存,不同时间取样制作的标准曲线重叠性高。后续时间测试暂未列出。

BCA试剂盒耐受测试

该试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。同时也可耐受10 mM EDTA ,100 mM 柠檬酸钠。

BCA试剂盒对各试剂的耐受浓度,请参照下表。

干货分享 | 蛋白定量的方法(二)插图6

BCA试剂盒特点

BCA蛋白定量有以下特点:1.在20-2000 μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。2.表面活性剂对浓度检测的干扰较小,但对还原剂和螯合剂不耐受。3.不同蛋白用BCA试剂盒检测,都会有独特的吸光度反应。通常使用BSA作为标准定量未知蛋白的浓度,但如果需要精确定量,请使用高纯度目的蛋白做标准品。

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